Questo lavoro fornisce dati utili per sviluppare un protocollo efficace di iniezione intracitoplasmatica di spermatidi nei bovini. Se spermatidi competenti e vitali verranno generati da spermatogoni o anche da cellule embrionali, questo approccio combinato offrirà una possibile alternativa per ridurre l’intervallo generazionale nei bovini.

Sviluppo di una procedura per l’isolamento, l’identificazione e valutazione della qualità di spermatidi bovini, e loro capacità fecondante in vitro.
In questo lavoro, abbiamo sviluppato un protocollo per isolare spermatidi dai testicoli di toro usando un gradiente discontinuo di Percoll e cell strainer con mesh di 10 μm. L’analisi morfologica ha rivelato che il 72,5% delle cellule isolate erano spermatidi, caratterizzati da un alto tasso di aploidia e livello di espressione genica dei marcatori di spermatide PRM1, PRM2, SPACA9, SPERT nonché dal rilevamento dell’espressione della proteina SPERT. A 0 e 24 ore, a 4°C in ambiente atmosferico e 37°C al 5% di anidride carbonica, le cellule erano ancora vive e il loro DNA era integro. Tuttavia, l’attività mitocondriale e i livelli di specie reattive dell’ossigeno risultavano elevati nelle cellule coltivate, suggerendo la presenza di stress ossidativo. Solo il 13,4% degli ovociti iniettati con spermatidi ha formato due pronuclei, mentre il 46,3% mostrava un pronucleo e un ammasso di cromatina condensata all’interno dell’ooplasma.

I Centri genetici delle associazioni allevatori e quelli di tecnologie avanzate di riproduzione assistita dove l’uso di spermatidi per la fecondazione in vitroconsente di accelerare la selezione genetica per i caratteri multifattoriali che regolano le doti di resilienza, efficienza e resistenza allo stress da caldo.